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技术文章

各种动物外周血血小板分离液试剂盒技术说明书

各种动物外周血血小板分离液试剂盒
规格: 3×200 mL/kit
保存: 本产品对光敏感,应该室温 避光储存,保质期 2 年。无菌开封后,保存于室温。
组成:
各种动物外周血血小板分离液 200mL
全血及组织稀释液 200mL
细胞洗涤液 200mL
操作步骤 :
1. 取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的
全血及组织稀释液
或者 PBS 稀释全血。
2. 在离心管中加入至少 5mL 的分离液(当血液的体积大于等于 3mL,加入 2 倍体积分离液,
但二者的总体积不能
超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果)。
3. 将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰(可以使用巴氏德吸
管吸取血液,然后将
血液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。如果样品较多,
加样的时间较
长,在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象)。
4. 室温,水平转子 200-250g ,离心 15min(血液的体积越大所需的离心力越大,离心时
间越长,*佳的分离条
件需摸索)。
5. 离心后,此时离心管中由上至下分为四层:*上层为富含血小板的血浆层;第三层为分
离液层;分离液与血
浆层之间是白色细胞层;第四层为红细胞层。
6. 小心的吸取富含血小板的血浆层到 15mL 洁净的离心管中,加
入 10mLPBS 或细胞洗涤液(如果需要得到富含血小板的血浆,
可直接吸取,不再清洗)。500g,离心 20min。
7. 弃上清,5mL 的 PBS 或细胞洗涤液重悬血小板,500g,离心
20min。
8. 弃上清,重悬备用。
注意事项 :
A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时
间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。。
B. 分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较
低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心,分
离效果差。
C. 吸取过多的血小板血浆层下层溶液会导致交界处白细胞混杂。
D. 血液样本*好为新鲜抗凝血(采血 2 h 以内),避免冷冻和冷
E. 稀释血液或洗涤细胞,不可使用含 Ca、Mg 离子的缓冲液及培养液,降低细胞得率及纯
度。
F. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效
果。
G. 血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以对血液稀释或者是调节
离心转数和离心时间,
摸索*佳的分离条件。
H. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液
时应提供所需分离液
的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
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