赫澎(上海)生物科技有限公司 主营: 赫澎(上海)生物科技有限公司自主品牌“赫澎”,主要产品包括生物试剂,标准品,培养基,elisa试剂盒,多肽合成,仪器仪表等3万+产品。品种齐全,品质优良。
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技术文章

IgM 类小鼠单克隆抗体纯化试剂盒使用说明书

试剂特点:
本试剂盒特点在于纯化操作的简单化、所得抗体保持高活性和较高纯度。实
验表明,本试剂盒可以得到 90%以上纯度的抗体;并且由于配方考究,抗体
在纯化过程中几乎没有损伤,完全保持应有的活性;实际应用极好。 适用范围:
本试剂盒适用于小鼠 IgM 类单克隆抗体腹水的纯化,不能用于 IgG 和 IgA 类
单克隆抗体腹水的纯化实验,如需要可选择本公司其它货号的纯化试剂,它
能为您带来良好的结果。 试剂组成:
试剂名称 数量 试剂名称 数量
纯化液 A 50ml 纯化液 E 5ML
纯化液 B 50mL 透析试剂(粘稠或固体) 配 8L 量
纯化液 C 50mL 透析袋 4 份
纯化液 D 50mL 说明书 1 份
纯化步骤:
1、从冰箱中取出试剂盒放置室温恢复温度 30 分,期间可将单克隆
抗体腹水从冰箱中取出,室温避光复温 15 分钟,随后用自来水
边冲边摇匀快速解冻。
2、将化开的单克隆抗体腹水 8000-12000RPM 室温 离心 10 分钟。
3、先吸弃*上面浮沫和油脂,然后将上清转出到另一个干净容器或
离心管;按每 1 毫升单克隆抗体腹水加入纯化液 A(加前确定没
有试剂析出,如有析出摇晃溶解即可) 1 毫升(必须**),室
温避光倒转 30 分。
4、8000RPM 室温离心 10-20 分钟,沉淀用纯化液 B 溶解到原单克隆
抗体腹水 1/2 体积,再按此体积每 1 毫升加入纯化液 C (加前确
定没有试剂析出,如有析出摇晃溶解即可)1 毫升((必须**),
室温避光倒转 10 分钟。
5、8000RPM 室温离心 10-20 分钟,弃沉淀收集上清;每 1 毫升上
清液加纯化液 D(加前确定没有试剂析出,如有析出摇晃溶解即
可) 1 毫升(必须**),室温避光倒转 20 分钟。
6、8000RPM 室温离心 10-20 分钟,收集沉淀用纯化液 B 收集溶解沉
淀到原单克隆抗体腹水体积的 1/3。透析袋用纯水浸泡 5 分钟,
然后用手揉捏数次,接纯水冲洗干净,抗体放入扎好。透析液用
纯水溶解透析试剂到 8L(也可先溶解到 400ML,用时 20X 稀释),
将要透析的抗体袋子放入。抗体体积:透析液体积=1:100,4℃
透析过夜。收集透析后抗体。
7、以透析后抗体体积:纯化液 E 的体积=9:1 的比例加入纯化液 E
摇匀(也就是 9 体积抗体加 1 体积纯化液 E),静置 5min。8000RPM
室温离心 10 分钟,弃沉淀收集上清即为纯化好的抗体。
8、将纯化好的抗体放入用透析夹或绳扎紧。抗体体积:透析液体积
=1:50 以上;4℃透析,中间换液三次,透析总时间不超过 24 小
时。然后 8000RPM 室温离心 10 分钟,收集上清测蛋白浓度并调
控在 5mg/ml 左右*后加 10/万 NaN3 防腐并**过滤-20℃备用。 注意事项:
1、溶血严重和腐败的腹水不得用于纯化。
2、离心温度不要超过 37℃。
3、操作和量取试剂要细致精准,否则影响纯度。
4、不搅拌透析每次静置透析时间不得低于 4 小时。
5、如觉得透析太慢可以选择超滤管。
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